紫外分光光度計為了zui大程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi),顆粒的干擾相對較小,結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高。zui后是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現(xiàn)負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的zui小體積等多個操作事項。對于一個特定的波長,吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度,因此測量光譜可以進行定性分析,而且根據(jù)吸收與已知濃度的標樣的比較,還能進行定量分析。
如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現(xiàn)負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大,換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致。所有的樣品,都必須在此時間內(nèi)測試。時間過長,得到的吸光值變小,換算的濃度值降低。除此,反應溫度、溶液PH值等都是影響實驗的重要原因。是用塑料的比色法,避免使用石英或者玻璃材質(zhì)的比色杯,因為反應后的顏色會讓石英或者玻璃著色,導致樣品吸光值不準確。紫外分光光度計基本工作原理和紅外光譜儀相似,利用一定頻率的紫外可見光照射被分析的有機物質(zhì),引起分子中價電子的躍遷,它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長而變化的光譜,反映了試樣的特征。